【產(chǎn)品編號(hào)】2793950

【英文名稱(chēng)】Locus-specific, quantitative 5fC analysis Kit

【中文名稱(chēng)】特定位點(diǎn)5-醛基胞嘧啶定量檢測(cè)試劑盒

【產(chǎn)品內(nèi)容】

注：溶液L1：丙二腈反應(yīng)液；M：丙二腈

【保存條件】模式序列置于-20 °C，可保存12個(gè)月。

                     M和溶液L1置于4 °C，可保存12個(gè)月。

 M需避光保存。

【產(chǎn)品概述】

5-甲基胞嘧啶修飾（5mC）是真核細(xì)胞基因組中最為重要的表觀遺傳修飾之一。5mC可以在TET家族酶的作用下逐步氧化生成5-羥甲基胞嘧啶（5hmC）、5-醛基胞嘧啶（5fC）和5-羧基胞嘧啶（5caC）；對(duì)于上述幾種新型DNA修飾的功能研究是目前核酸表觀遺傳學(xué)的一個(gè)研究熱點(diǎn)。

百靈威推出新型5fC檢測(cè)試劑盒，它主要用于5-醛基胞嘧啶（5-formylcytosine, 5fC）的全基因組單堿基分辨率測(cè)序；也可應(yīng)用于5fC在生物發(fā)育和疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程的生物學(xué)功能研究。

【自備材料】

• Oligo Clean & Concentrator (ZYMO, #D4060)

• MightyAmp® DNA Polymerase Ver.3(TaKaRa, Cat.#R076A)

• 無(wú)水乙醇

• 滅菌超純水

• 低吸附EP、PCR管

• PCR熱循環(huán)儀

• Thermo-mixer (Eppendorf)

【注意事項(xiàng)】  

A.避免樣品交叉污染

吸取不同樣品時(shí)更換槍頭

B.酶的取放應(yīng)在冰上進(jìn)行，為避免反復(fù)凍融或長(zhǎng)期使用后活性下降,我們推薦您在首次使用后將剩余試劑小份分裝凍存

【實(shí)驗(yàn)步驟】

起始材料：純化后的基因組DNA，溶于EB中。

DNA純度要求：OD260／OD280＝1.8～2.0

1）在純化的基因組DNA中加入1ul M，1ul溶液L1和1ul模式序列，充分混勻，將其置于Thermo-mixer (Eppendorf)中，37°C，850rmp避光反應(yīng)20h。

2）5fC標(biāo)記完成后，按照MightyAmp® DNA Polymerase Ver.3(TaKaRa, Cat.#R076A)說(shuō)明書(shū)對(duì)特異性的位點(diǎn)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

3）按照Oligo Clean & Concentrator (ZYMO, #D4060)說(shuō)明書(shū)純化PCR后的DNA, 用30ul 超純水洗脫，于-20°C保存。